Aislamiento, caracterización cultural, morfológica, patogénica e identificación de genes AVR en Cladosporium fulvum Cooke.
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Date
2023-12
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Abstract
Gray mold caused by Cladosporium fulvum was described by Cooke in 1883, which
develops in nightshades, specifically in tomato crops, causing damage from the youngest
leaves to the top of the plant. The objective of this research was to "Isolate and characterize
culturally, morphologically and pathogenically monosporic isolates of Cladosporium
fulvum" obtained from signs of gray mold on Solanum lycopersicum leaves to identify the
presence or absence of Avr genes in the cantons of the province of Tungurahua (Ambato,
Baños, Cevallos, Mocha, Patate, Pelileo, Píllaro, Tisaleo). For isolation, the leaf printing
method was applied in potato dextrose (PDA) culture medium with gentamicin sulfate, to
describe the cultural and morphological characteristics, the microculture method was used
accompanied by the observation of fungal structures under an optical microscope. of
transmitted light. In the pathogenic characterization, the isolates of C. fulvum were activated
The conidia were counted in the Neubauer chamber of the differential cultivars previously
sown on substrates and the inoculum was applied with a manual sprayer. For amplification,
DNA extraction and lyophilization of each of the isolates was carried out prior to
development. of conventional PCR with two denaturations at 94°C with different cycles and
an annealing at 55°C and 34 cycles with a final extension of 72°C. Obtaining that in the 8
cantons of the province of Tungurahua they all showed olive green colors on the obverse,
while on the back it was black, with a superficial elevation, plush texture and irregular shape,
lobed edges and in some isolates there was pigmentation and perspiration liquid, the mycelial
growth in the colonies was obtained with a length of 5.93 µm, width 2.8 µm, hyphae 5.37
µm and conidiophores 32.97 µm average values. In the pathogenic characterization it was
evident that the degree of affectation 1 represented between 1 to 5% of the surface of leaves
with signs of C. fulvum, while 2 varied from 6 to 20% in the differential cultivars (Cf0-Cf2-
Cf4- Cf5-Cf6), finally in the detection of the presence or absence of genes, the presence of
the genes Avr2, Avr4e, Ecp2, Ecp4 and Ecp5 and total absence of the genes Avr4, Avr9 and
Ecp1 were observed. Based on the results and the tests carried out, it was possible to create
bases for the selection of resistance genes for the production of S. lycopersicum hybrids in
the province of Tungurahua.
Description
El moho gris causado por Cladosporium fulvum fue descrito por Cooke en el año 1883, el
cual se desarrolla en solanáceas, específicamente en el cultivo de tomate, ocasionando daños
desde sus hojas más jóvenes hasta llegar a la parte superior de la planta. En la presente
investigación se tuvo como objetivo “Aislar y caracterizar cultural, morfológica y
patogénicamente aislados monospóricos de Cladosporium fulvum” obtenidos a partir de
signos de moho gris en hojas de Solanum lycopersicum para identificar la presencia o
ausencia de genes Avr en los cantones de la provincia de Tungurahua (Ambato, Baños,
Cevallos, Mocha, Patate, Pelileo, Píllaro, Tisaleo). Para el aislamiento se aplicó el método
de impresión de hoja en medio de cultivo papa dextrosa (PDA) con sulfato de gentamicina,
para describir las características culturales y morfológicas, se utilizó el método de
microcultivo acompañado de la observación de estructuras fúngicas bajo un microscopio
óptico de luz transmitida. En la caracterización patogénica se activó los aislados de C. fulvum
el conteo de los conidios se realizó en la cámara de Neubauer de los cultivares diferenciales
previamente sembrados en sustratos y el inóculo se aplicó con un aspersor manual, para la
amplificación se realizó la extracción y liofilización de ADN de cada uno de los aislados
previo al desarrollo de la PCR convencional con dos desnaturalizaciones a 94°C con
diferentes ciclos y una hibridación a 55°C y 34 ciclos con una extensión final de 72°C.
Obteniendo que en los 8 cantones de la provincia de Tungurahua mostraron todos colores
verdes oliváceos en el anverso, mientras que en reverso fue de color negro, con una elevación superficial, textura afelpada y forma irregular, bordes lobulados y en algunos aislados se
presentó pigmentación y líquido de traspiración, el crecimiento micelial en las colonias se
obtuvo un de largo de 5,93 µm, ancho 2,8 µm, hifas 5,37 µm y conidióforos 32,97 µm valores
promedios. En la caracterización patogénica se evidenció que el grado de afectación 1
representó entre 1 al 5 % de la superficie de hojas con signos de C. fulvum, mientras que 2
varió en 6 al 20 % en los cultivares diferenciales (Cf0-Cf2-Cf4-Cf5-Cf6), finalmente en la
detección de la presencia o ausencia de genes se observó la presencia de los genes Avr2,
Avr4e, Ecp2, Ecp4 y Ecp5 y total ausencia de los genes Avr4, Avr9 y Ecp1. Con base en los
resultados y las pruebas realizadas, se logro crear bases para la selección de genes de
resistencia para la producción de híbridos de S. lycopersicum en la provincia de Tungurahua.
Keywords
AGRONOMÍA, AGROPECUARIA, NUTRICIÓN VEGETAL, NUTRICIÓN, Cladosporium fulvum Cooke, AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN CULTURAL, MORFOLOGÍA, PATOGÉNICA, GENES AVR, GENES, AVR, IDENTIFICACIÓN DE GENES, AVIRULENCIA, HEMIBIOTRÓFICO, MOHO GRIS