Ciencia e Ingeniería en Alimentos y Biotecnología
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Item Construcción de las variantes mutantes I208V/N212A, I208V/S238Y y N212A/S238Y de la enzima PETasa de Ideonella sakaiensis(Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos y Biotecnología. Carrera de Biotecnología, 2023-09) Gavilanes Flores, Vivian Samantha; García Solís, Mario DanielPlastic production in 2021 reached 390.7 million tons, of which 6.2 percent corresponded to PET. Unfortunately, only 10 percent of this material was recycled, 14 percent was incinerated, and the rest was released into the environment. PET has a low level of degradation and a useful life of 450 years, so its accumulation in the environment is worrying. For this reason, strategies have been developed for its degradation, such as biodegradation, based on the use of microorganisms or their enzymes. The PETase enzyme from Ideonella sakaiensis has demonstrated a superior ability to break down PET up to 120 times more than other homologous enzymes. Despite the high rate of degradation of PET by PETase, it cannot yet be used as a large-scale method, due to its sensitivity to slight changes in temperature and salinity. Therefore, in the present investigation, the double variants I208V N212A, I208V S238Y, and N212A S238Y have been introduced into the enzyme by mutagenic PCR. And the result of the enzymatic catalysis was evaluated through SEM, a method that allows visualizing the morphology of the surface of the PET treated with the mutants. It was determined by SEM that the double mutant N212A S238Y exhibited the highest rate of PET degradation. In addition, the enzymes with the I208V N212A and N212A S238Y variations reached their maximum catalytic activity at 35 degrees Celsius, and the I208V S238Y mutant lost its activity.Item Construcción de variantes mutantes de la enzima PETasa de Ideonella sakaiensis(Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos y Biotecnología. Carrera de Biotecnología, 2022-09) Sevilla Cevallos, María Eduarda; Cerda Mejía, Liliana AlexandraIndiscriminate plastic production has become a serious environmental problem due to the lack of an efficient treatment. Polyethylene terephthalate (PET) is one of the most used polymers, however chemical and physical options for its degradation are not efficient, neither environmentally friendly. During the last decade, PET biologic treatment has aroused great interest, since it allows the complete degradation of this polymer, and its degradation products work as raw material to produce new PET. Consequently, biological degradation makes it possible to establish a circular system for the use of PET. This investigation built mutant variants of the Ideonella sakaiensis PETase, based on a structural and computational analysis of the enzyme to rationally design variants that potentially increase the enzymatic activity on PET. I208V, N212A and S238Y mutations presented a greater difference in binding energies, suggesting high affinity for the substrate and a low one for the reaction products. Mutant variants were built by site-directed mutagenesis using QuickChange II kit, and through Sanger sequencing it was confirmed that at least two clones of each mutant variant got the desired sequence. Obtained mutations were expressed in E. coli Rosetta (DE3) under expression assay established conditions, 0.1 mM IPTG and 22°C overnight (approx. 15 h). Finally, expressed mutants were purified through affinity chromatography (FPLC) using a Ni-NTA column coupled to an FPLC system. The presence of the enzyme of interest was verified by SDS-PAGE electrophoresis.Item Producción de la enzima recombinante Xyn30D de Paenibacillus barcinonensis para la degradación de residuos agroindustriales(Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos y Biotecnología. Carrera de Ingeniería en Alimentos, 2020-01) Arévalo López, Yessenia Abigail; Cerda Mejía, Liliana AlexandraThe purpose of this study was to obtain the recombinant enzyme Xyn30D from Paenibacillus Barcinonensis, which after its expression in E. coli BL21 (DE3) and (TF2) and extraction, its degrading activity on agroindustrial waste was analyzed based on its specific enzyme activity (U/mg protein). Enzymatic activity was measured through the quantification of reducing sugars produced from the digestion of agroindustrial waste after the enzymatic reaction at 50 Celsius degrees and at different time intervals. Cocoa husk was the substrate that showed the highest enzymatic activity (468.3 Units per mg protein) with an incubation time of 15 minutes, followed by cane bagasse, corn stubble and rice bran. Additionally, the enzymatic activity on its optimal substrate (beech wood xylan) was calculated with enzymatic reactions at 15 and 30 minutes, obtaining values of 88.67 and 57.46 Units per mg protein. Finally, the identification of the products generated by the enzymatic reaction of Xyn30D on agroindustrial waste by means of the HPTLC technique, which showed the degradation products obtaining xylobiose and xylooligosaccharides as mentioned in the literature. On the other hand, when analyzing the degradation products of the synergy between Xyn30D and Cel6D, xylobiose, cellobiose, celooligosaccharides and xylooligosaccharides were obtained.Item Aplicación de un tratamiento enzimático con enzimas pectolíticas (pectinex ultra sp-l y ultrazym afpl) en la obtención de una bebida tipo vino de mortiño (Vaccinium floribundum Kunth) y su efecto en el contenido de antocianinas(Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos. Carrera de Ingeniería en Alimentos, 2014) Jácome Montaluisa, José Andrés; Navas Miño, Gladys CeciliaItem Utilización de enzimas amilasas (Fungamyl) en la fermentación ácido-láctica de una colada de morocho (Zea mays, variedad Morochon) con microorganismos probióticos (Cultivo lácteo SLB 953: Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophillus) y (Lactobacillus casei)(Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos. Carrera de Ingeniería en Alimentos, 2014) Ojeda Sánchez, Darío Israel; Navas Miño, Gladys CeciliaItem Determinación del contenido de beta - glucanos en líneas avanzadas y en variedades de cebada, procesada y no procesada, por medio de un método enzimático(2011) Moreano Culqui, Fernanda JacquelineEl presente trabajo de investigación se realizó con el objetivo de clasificar las diferentes variedades y líneas de cebada existentes en nuestro país, para posteriormente orientar su uso de acuerdo al contenido de beta-glucanos. De las 70 líneas y/o variedades de cebada analizadas, los genotipos con mayor aptitud para el consumo humano basado en el contenido de beta-glucanos son: la variedad INIAP GUARANGA, la línea CD-09-009 y CM-09-007, que reportaron concentraciones de 3.74, 3.72 y 3.63% respectivamente. No se encontró una correlación positiva entre; la acción de las beta-glucanasas sobre la concentración de beta-glucanos y la viscosidad de los mostos, pero si, entre la concentración de beta-glucanos y la fibra dietética. De la clasificación realizada en función del contenido de beta-glucanos; se concluye que la variedad CAMELOT es la más apropiada para la industria cervecera, con un porcentaje de 0.38% de beta-glucanos, inferior al requerido (0,42%). Puesto que un bajo contenido de beta glucanos evita dificultades en el proceso de filtración, se minimice la turbidez y sedimentación en el almacenamiento del producto final. Se determinó también que el proceso de tostado y escarificado en la cebada, provocan un incremento en el contenido de beta-glucanos, con relación al grano no procesado, mientras que la cocción en agua y el malteado ocasionan su disminución. Considerando las propiedades de los beta-glucanos y su concentración en la cebada, se puede considerar a este cereal como un alimento funcional; capaz de proporcionar un efecto específico beneficioso en el organismo; más allá de su aporte nutricional.Item Extracción, concentración y cuantificación de la actividad enzimática de la bromelina a partir de la piña(Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos. Carrera de Ingeniería Bioquímica, 2011) Robayo Muñoz, Darío Francisco; Alvarado, Juan de DiosLa bromelina es una enzima purificada del fruto de la piña y consiste en una cisteína-proteinasa de naturaleza ácida perteneciente a la misma familia que la papaína, obtenida de la papaya o Carica papaya. La experiencia con enzima en el país esta despuntando y la bromelina, debido a sus diferentes usos, puede llegar a ser de gran importancia a nivel industrial. Para este estudio se trató de probar el efecto de 3 grados de maduración de la piña: verde, pintona y madura; y su efecto en la actividad enzimática de la enzima bromelina. Se trabajó con 10 piñas como base para cada grado de maduración de la fruta, repartidas en las 2 réplicas que se evaluaron, donde se trabajó con un total de tres tratamientos. Se seleccionó la fruta para los tres grados de maduración, en la extracción del jugo realizada por maceración del fruto de la piña en un mortero, luego se recolecta y se procede a secar en una incubadora a 30ºC durante 18±1 horas, dependiendo de la cantidad de jugo; de esta manera se logró concentrar la enzima y se la conservó en congelación. Para la evaluación de la actividad enzimática se utilizó determinaciones de viscosidad de la leche, obtenida por disolución de leche en polvo, añadida a ésta 10ml de una solución de 0,1g de la enzima disuelta en 100ml de ácido acético; con estos valores de viscosidad se realizaron curvas de tiempo (s) vs. viscosidad (mPa*s); en las que se realizó una regresión exponencial, obteniendo las respuestas experimentales que fueron los valores de corte con el eje y de éstas regresiones. Con el análisis estadístico se demostró que el mejor tratamiento es el T1 que corresponde a piñas verdes, es decir, que tiene mayor actividad enzimática con relación a los otros grados de madurez de piñas.