Formulación de un medio de cultivo líquido, enriquecido para el crecimiento de Avibacterium paragallinarum con el fin de producir la vacuna contra la Coriza Infecciosa, en la farmacéutica FARBIOVET S.A.

Abstract

Este estudio tuvo como finalidad la formulación de un medio de cultivo líquido, enriquecido para el crecimiento de Avibacterium paragallinarum con el fin de producir la vacuna contra la Coriza Infecciosa, en la farmacéutica FARBIOVET S.A. ubicada en la ciudad de Sangolquí en la provincia de Pichincha. En la farmacéutica cultivan actualmente a los 4 diferentes serotipos de la bacteria (A, B, C y Ecuador) por separado, en un medio de cultivo compuesto por: Caldo de soja tríptica (TSB) (37g), peptona de caseína (5g),suero equino (1ml) y agua destilada (1000ml). En esta investigación se trabajó únicamente con el serotipo A de A.paragallinarum, se inició aislando la cepa de un cultivo patrón que contenía la farmacéutica y para erificar que las cepas estuvieron completamente puras y que pertenecían a las cepas en estudio, se aplicó pruebas bioquímicas utilizando la galería API NH (Neisseria, Haemophilus), arrojando resultados positivos ertenecientes a la bacteria en mención. Las cepas aisladas, se las cultivaron en un inicio en el medio utilizado en la farmacéutica, para determinar la cinética de crecimiento que presentan. Debido a los requerimientos nutricionales de A. paragallinarum, aparte de el TSB y la peptona de caseína, se trabajó con tres factores para enriquecer el medio de ultivo, entre los cuales estuvieron: fuentes de nicotinamida adenina dinucleotido (NAD) (suero de pollo, suero ovino, extracto de levadura y sin fuente de NAD), fuente de hemina (extracto de sangre autoclavada de pollo, de oveja y sin fuente de hemina) y concentración de cloruro de sodio (NaCl) (1 y 1.5%); los 2 primeros factores reemplazaron alsuero equino utilizado en la farmacéutica, además de que se aumentó la cantidad de estos a 3ml por cada 1000ml de medio de cultivo. Resultaron 24. medios de cultivo combinando todos los factores, de los cuales de cada medio se realizó 3 réplicas para obtener datos de concentración bacteriana;unidades formadoras de colonias/ml (UFC/ml) confiables. Estos valores fueron cuantificados mediante espectrofotometría desde el tiempo 0 hasta las 22 horas de incubación, los datos fueron tomados a las 14 horas y de aquí en adelante cada 2 horas. Para la transformación de los valores de absorbancia obtenidos a UFC/ml se utilizó la escala McFarland. Finalmente mediante el procesamiento de las concentraciones bacterianas de cada medio a través del diseño experimental AxBxC, se obtuvo que el mejor medio de cultivo líquido enriquecido con mayor concentración bacteriana fue el que contenía suero de pollo, extracto de sangre autoclavada de pollo y 1% de NaCl, con una concentración aproximada de 3069643557 UFC/ml que al ser comparada con la concentración obtenida en el medio utilizado en la farmacéutica que fue de 2782528711 UFC/ml aproximadamente se logró un incremento del 10.31% en el medio formulado en esta investigación, indicando que los factores utilizados aportan más nutrientes y de esta manera con el medio obtenido se aportará con mayor concentración bacteriana para la elaboración de la vacuna contra la Coriza Infecciosa y de esta manera aumentar la producción de la misma.