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https://repositorio.uta.edu.ec/jspui/handle/123456789/30546| Título : | Validación de técnicas de PCR cuantitativa (qPCR) para la cuantificación de genes de resistencia a antibióticos |
| Autor : | Calero Cáceres, William Ricardo Valle Ramos, María Judith |
| Palabras clave : | BIOLOGÍA MOLECULAR MÉTODOS CUANTITATIVOS VALIDACIÓN PCR BACTERIAS AMBIENTALES GENES DE RESISTENCIA RESISTENCIA ANTIBIÓTICA |
| Fecha de publicación : | dic-2019 |
| Editorial : | Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos y Biotecnología. Carrera de Ingeniería Bioquímica |
| Resumen : | The increment in the usage of genomic techniques applied to diagnosis and research demands to have validated techniques, in order to obtain reliable and reproducible results during the experimental tests. This work aimed to validate real-time PCR (qPCR) techniques, using both TaqMan and Sybr Green methods. The applied equipment was 7500 Fast Real-Time PCR System thermal cycler. Pure standards of the different recombinant plasmids (blaTEM, sul1, qnrS, ermB, and 16S rDNA) were used. Additionally, a synthetic plasmid standard was designed for tetW gene. The results indicate that the standard curves presented high efficiencies (between 97.4 to 109. 8 percent), as well as linear correlations greater than 0.99 and limits of quantification between Ct 34.4 to 34.8. Therefore, it was demonstrated that the qPCR techniques have acceptable performances since the values obtained are within the optimal ranges. These validated qPCR techniques will be used as a control tool to evaluate the dissemination of antibiotic resistance genes from environmental samples, obtaining truthful data in a short time. |
| Descripción : | En la actualidad, es necesario contar con técnicas debidamente validadas para el desarrollo de investigaciones relacionadas en biología molecular, con la finalidad de obtener resultados confiables y reproducibles al momento de realizar las pruebas experimentales. El presente trabajo tuvo como objetivo validar técnicas de PCR en tiempo real, empleando técnicas TaqMan y Sybr Green. Para llevar a cabo la cuantificación en el termociclador 7500 Fast Real- Time PCR System, se utilizó estándares puros de los diferentes plásmidos recombinantes (blaTEM, sul1, qnrS, ermB y 16S rDNA) y en el caso del gen tetW se diseñó un estándar plasmídico sintético, para elaborar las curvas estándar a partir de un banco de diluciones seriadas de cada gen. En el análisis de resultados, las curvas estándar presentaron eficiencias altas del 97,4 al 109,8 por ciento, así como correlaciones lineales mayores a 0,99 y límites de cuantificación entre Ct 34,4 a 34,8. Por ende, se demostró que las técnicas de qPCR tienen un rendimiento aceptable, pues lo valores obtenidos se encuentran dentro de los rangos óptimos. Estas técnicas de qPCR validadas se utilizarán como una herramienta de control para evaluar la diseminación ambiental de genes de resistencia a antibióticos en diferentes matrices ambientales. |
| URI : | https://repositorio.uta.edu.ec/jspui/handle/123456789/30546 |
| Aparece en las colecciones: | Carrera Ingeniería Bioquímica |
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