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Title: Producción de la enzima recombinante Xyn30D de Paenibacillus barcinonensis para la degradación de residuos agroindustriales
Authors: Cerda Mejía, Liliana Alexandra
Arévalo López, Yessenia Abigail
Keywords: ENZIMAS
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
BIOTECNOLOGÍA MICROBIANA
MANIPULACIÓN GENÉTICA
RESIDUOS AGROINDUSTRIALES
BIOMASA VEGETAL
PAENIBACILLUS BARCINONENSIS
Issue Date: Jan-2020
Publisher: Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos y Biotecnología. Carrera de Ingeniería en Alimentos
Abstract: The purpose of this study was to obtain the recombinant enzyme Xyn30D from Paenibacillus Barcinonensis, which after its expression in E. coli BL21 (DE3) and (TF2) and extraction, its degrading activity on agroindustrial waste was analyzed based on its specific enzyme activity (U/mg protein). Enzymatic activity was measured through the quantification of reducing sugars produced from the digestion of agroindustrial waste after the enzymatic reaction at 50 Celsius degrees and at different time intervals. Cocoa husk was the substrate that showed the highest enzymatic activity (468.3 Units per mg protein) with an incubation time of 15 minutes, followed by cane bagasse, corn stubble and rice bran. Additionally, the enzymatic activity on its optimal substrate (beech wood xylan) was calculated with enzymatic reactions at 15 and 30 minutes, obtaining values of 88.67 and 57.46 Units per mg protein. Finally, the identification of the products generated by the enzymatic reaction of Xyn30D on agroindustrial waste by means of the HPTLC technique, which showed the degradation products obtaining xylobiose and xylooligosaccharides as mentioned in the literature. On the other hand, when analyzing the degradation products of the synergy between Xyn30D and Cel6D, xylobiose, cellobiose, celooligosaccharides and xylooligosaccharides were obtained.
Description: La finalidad de este estudio fue la obtención de la enzima recombinante Xyn30D proveniente de Paenibacillus Barcinonensis, la cual posterior a su expresión en E. coli BL21(DE3) y (TF2) y extracción, se analizó su actividad degradadora sobre residuos agroindustriales en función de su actividad enzimática especifica (Unidades por mg de proteína). La actividad enzimática se midió a través de la cuantificación de azúcares reductores producidos de la digestión de los residuos agroindustriales después de la reacción enzimática a 50 grados Centígrados y a diferentes intervalos de tiempo. La cáscara de cacao fue el sustrato que presentó mayor actividad enzimática (468,3 Unidades por mg proteína) con un tiempo de incubación de 15 minutos, seguida de bagazo de caña, rastrojo de maíz y salvado de arroz. Adicionalmente se calculó la actividad enzimática sobre su sustrato óptimo (xilano de madera de haya) con reacciones enzimáticas a 15 y 30 minutos, obteniendo valores de 88,67 y 57,46 Unidades por mg proteína. Por último, la identificación de los productos generados por la reacción enzimática de Xyn30D sobre residuos agroindustriales mediante la técnica de HPTLC, el cual mostró los productos de degradación obteniendo xilobiosa y xilooligosacáridos como se menciona en bibliografía. Por otra parte, al analizar los productos de degradación de la sinergia entre Xyn30D y Cel6D se obtuvo xilobiosa, celobiosa, celooligosacáridos y xilooligosacáridos.
URI: https://repositorio.uta.edu.ec/jspui/handle/123456789/30789
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