Estudio de la actividad antioxidante de aislados proteicos de harina de haba pallar (Phaseolus Iunatus L.) y su digestibilidad gástrica y duodenal (in vitro)
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Date
2018-07
Authors
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Publisher
Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos. Carrera de Ingeniería Bioquímica
Abstract
In this research, the protein present in the lima - bean (Phaseolus lunatus L.) was isolated by isoelectric precipitation at pH 3, 4, 5 and 6, obtaining a superior yield at pH 6 (32, 58percent more less 0,30). In addition, quantification of protein isolates was carried out using the Biuret and Kjeldahl method, obtaining in both cases the higher protein content in the treatment at pH 5 corresponding to 71,33 percent and 42,31 percent, respectively. The protein isolates were characterized by the SDS-PAGE electrophoresis technique with the use of 2-mercaptoethanol, obtaining from it, high molecular weight protein fractions such as 7 S and 11 S globulins (acid and basic subunit) and 2 S albumins low molecular weight. Gastric digestion (DG) of the protein (in vitro) was carried out at pH 1.2, 2 and 3.2 by the action of the enzyme pepsin and duodenal digestion (DD) was carried out at pH 3.2 with pancreatin, both in the DG and DD, only the high molecular weight fraction corresponding to 7S globulins were digested, while proteins of molecular weight smaller than
45 kDa showed a low digestibility. Biologic activities: such as anti-inflammatory and antioxidant, were evaluated by the protein denaturation and the TBARS method, respectively; using the bean protein at different concentrations (100, 200, 500 and 1000) ug per ml. At pH 3 at a concentration of 1000ug per ml, the highest anti-inflammatory inhibition was obtained, corresponding to 37,55 percent, while at pH 6 the best antioxidant activity (68 percent) was obtained at a concentration of 1000 ug/ml, compared to the other pH studied.
Description
En esta investigación se aisló la proteína de haba pallar (Phaseolus lunatus L.) por medio de precipitación isoeléctrica a pH 3, 4, 5 y 6, obteniendo un rendimiento superior a pH 6 (32, 58 por ciento más menos 0.30). Además, se realizó la cuantificación de los aislados proteicos mediante el método de Biuret y Kjeldahl, en ambos casos el mayor contenido proteico fue a pH 5 con un71,33 por ciento y 42,31por ciento, respectivamente. Los aislados proteicos se caracterizaron mediante electroforesis SDS-PAGE con el empleo de 2-mercaptoetanol, obteniendo fracciones proteicas de alto peso molecular como las Globulinas 7 S y 11 S (subunidad ácida y básica) y albúminas 2 S de bajo peso molecular. La digestión gástrica (DG) de la proteína (in vitro) se llevó a cabo a pH 1.2, 2 y 3.2 con la enzima pepsina y la digestión duodenal (DD) se llevó a cabo a pH 3.2 con pancreatina, tanto en la DG como en la DD, la fracción de peso molecular alto correspondiente a las globulinas 7S, fueron digeridas, mientras que las proteínas de peso molecular menor a 45 kDa presentaron una baja digestibilidad. Las actividades biológicas: antiinflamatoria por el método de desnaturalización de albúmina y antioxidante por el método TBARS fueron analizadas a diferentes concentraciones de proteína (100, 200, 500 y 1000ug por ml). A pH 3 a una concentración de 1000 ug por ml se obtuvo la mayor inhibición antiinflamatoria (37, 55 por ciento), mientras que a pH 6 se obtuvo la mejor actividad antioxidante (68 por ciento) a una concentración de 1000 ug por ml, en comparación a los demás pH estudiados.
Keywords
ALIMENTOS FUNCIONALES, ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE, AISLADOS PROTEICOS, DIGESTIBILIDAD IN VITRO, LEGUMINOSAS, HABA PALLAR