Uso de la endolisina fágica LysK recombinante frente a cepas de Staphylococcus warneri
| dc.contributor.advisor | Garcés Moncayo María Daniela | |
| dc.contributor.author | Castañeda Chinga Jean Carlos | |
| dc.date.accessioned | 2025-07-28T16:43:42Z | |
| dc.date.issued | 2025-07 | |
| dc.description | La resistencia antimicrobiana representa una de las principales amenazas para la salud pública mundial, con proyecciones que estiman 10 millones de muertes anuales para 2050 si no se desarrollan alternativas terapéuticas efectivas. En este contexto, las endolisinas bacteriofágicas emergen como agentes antimicrobianos prometedores debido a su especificidad, eficacia y bajo potencial de generación de resistencia. El presente trabajo de investigación se enmarca en la búsqueda y desarrollo de nuevos agentes antimicrobianos, centrándose en la expresión recombinante, purificación y caracterización de la endolisina LysK derivada del bacteriófago vB-G30-01. La metodología implementada comprendió tres fases principales: primero, la expresión heteróloga de la endolisina en Escherichia coli BL21 mediante el sistema pET-28a, optimizando las condiciones de inducción con IPTG; segundo, la purificación de la proteína recombinante mediante cromatografía de afinidad Ni-NTA y verificación por SDS-PAGE; y tercero, la evaluación de la actividad antimicrobiana in vitro contra Staphylococcus warneri mediante determinación de concentraciones mínimas inhibitorias y bactericidas. La novedad científica del estudio radica en la caracterización funcional de una endolisina identificada en el genoma de un bacteriófago autóctono, constituyendo el primer reporte de expresión recombinante y evaluación antimicrobiana de esta enzima lítica específica. Los resultados de la actividad antimicrobiana de Lysk hidrolasa proporcionan bases para el desarrollo futuro de esta endolisina como alternativa terapéutica en el tratamiento de infecciones estafilocócicas, contribuyendo significativamente al arsenal de herramientas biotecnológicas disponibles para combatir la resistencia antimicrobiana. | |
| dc.description.abstract | Antimicrobial resistance represents one of the main threats to global public health, with projections estimating 10 million annual deaths by 2050 if effective therapeutic alternatives are not developed. In this context, bacteriophage endolysins emerge as promising antimicrobial agents due to their specificity, efficacy, and low potential for resistance generation. The present research work is focused on the recombinant expression, purification, and characterization of the LysK endolysin derived from bacteriophage vB_G30_01. The implemented methodology comprised three main phases: first, heterologous expression of the endolysin in Escherichia coli BL21 using the pET-28a(+) system, optimizing induction conditions with IPTG; second, purification of the recombinant protein through Ni-NTA affinity chromatography and verification by SDS-PAGE; and third, evaluation of in vitro antimicrobial activity against Staphylococcus warneri through determination of minimum inhibitory and bactericidal concentrations.The scientific novelty of the study lies in the functional characterization of a native endolysin identified in the genome of an autochthonous bacteriophage, constituting the first report of recombinant expression and antimicrobial evaluation of this specific lytic enzyme. The obtained antimicrobian results provide solid foundations for the future development of this endolysin as a therapeutic alternative in the treatment of staphylococcal infections, contributing significantly to the arsenal of biotechnological tools available to combat antimicrobial resistance. | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.uta.edu.ec/handle/123456789/44948 | |
| dc.language.iso | es | |
| dc.publisher | Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos y Biotecnología. Carrera de Biotecnología | |
| dc.subject | BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL | |
| dc.subject | RESISTENCIA ANTIMICROBIANA | |
| dc.subject | PATÓGENOS NOSOCOMIALES EMERGENTES | |
| dc.subject | BACTERIÓFAGOS | |
| dc.subject | ENDOLISINAS | |
| dc.subject | ENDOLISINA FÁGICA LYSK | |
| dc.subject | STAPHYLOCOCCUS WARNERI | |
| dc.title | Uso de la endolisina fágica LysK recombinante frente a cepas de Staphylococcus warneri | |
| dc.type | bachelorThesis |
