Cerda Mejía, Liliana AlexandraMorales Valencia, Karla Pamela2024-08-212024-08-212024-08https://repositorio.uta.edu.ec/handle/123456789/42326En los últimos años, la población mundial se ha duplicado, lo que ha aumentado la demanda de recursos y la contaminación ambiental debido a la extracción indiscriminada de materias primas. Esto ha generado la necesidad de utilizar alternativas más sostenibles, como la lignocelulosa, que es una de las principales fuentes de biomasa más abundantes. Sin embargo, su compleja estructura requiere pretratamientos costosos y contaminantes, haciéndola menos rentable. A pesar de esto, se han desarrollado pretratamientos alternativos, como el uso de enzimas capaces de degradar lignocelulosa. El hongo Trichoderma reesei es conocido por producir enzimas eficaces en la descomposición de biomasa, como las xilanasas de la familia GH30. Entre estas enzimas destaca la XynVI, eficiente en la degradación de lignocelulosa. En este proyecto, se analizó la actividad de la xilanasa XynVI, desde la construcción del plásmido hasta su expresión en E. coli BL21 (DE3) y purificación por cromatografía de afinidad (IMAC). Además, se evaluaron el pH y temperatura óptimos de la enzima usando xilano de haya como sustrato. Como resultado, se observó una expresión deficiente de la enzima y baja concentración tras la purificación. No obstante, la XynVI mostró una actividad enzimática cercana a 5 unidades por miligramo de proteína a una temperatura de 60 grados centígrados y pH de 5.1, con una diferencia de 10 grados por encima de la temperatura óptima reportada en la literatura.In recent years, the global population has doubled, leading to an increased demand for resources and environmental pollution due to the indiscriminate extraction of raw materials. This has generated the need to use more sustainable alternatives, such as lignocellulose, which is one of the most abundant sources of biomass. However, its complex structure requires costly and polluting pretreatments, making it less profitable. Despite this, alternative pretreatments have been developed, such as the use of enzymes capable of degrading lignocellulose. The fungus Trichoderma reesei is known for producing enzymes effective in the decomposition of biomass, such as xylanases from the GH30 family. Among these enzymes, XynVI stands out for its efficiency in lignocellulose degradation. In this project, the activity of xylanase XynVI was analyzed, from plasmid construction to its expression in E. coli BL21 (DE3) and purification by affinity chromatography (IMAC). Additionally, the optimal pH and temperature of the enzyme were evaluated using beechwood xylan as a substrate. As a result, deficient expression of the enzyme and low concentration after purification were observed. Nonetheless, XynVI showed an enzymatic activity of approximately 5 units per milligram of protein at a temperature of 60 degrees Celsius and pH of 5.1, with a difference of 10 degrees above the optimal temperature reported in the literature.spaopenAccessBIOTECNOLOGÍA AMBIENTALBIOMASA LIGNOCELULÓSICALIGNOCELULOSAACTIVIDAD ENZIMÁTICAXILANASATRICHODERMA REESEIXILANO DE HAYAbachelorThesis