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Title: Determinación de vitamina B2 (Riboflamina) por Cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) en el Laboratorio ECUACHEMLAB Cía. Ltda.
Authors: Córdova Suárez, Manolo Alexander
Semanate Bautista, Mario Fernando
Keywords: VALIDACIÓN
MÉTODOS ANÁLITICOS
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
RIBOFLAMINA
LABORATORIOS
ECUACHEMLAB CÍA. LTDA.
Issue Date: Sep-2016
Publisher: Universidad Técnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos. Carrera de Ingeniería Bioquímica
Abstract: The validation of analytical methods is an essential process that laboratories must implement to ensure that the results of analyzes are reliable and reproducible with a basis and statistical analysis. Similarly, the methodology used for validation shows a great performance in working conditions of Ecuachemlab. For the determination of Vitamin B2 (Riboflavin) using high-performance liquid chromatography (HPLC), the methodology described in the AOAC 970.65 Method modified and ISO / IEC 17025 were used. They describe the guidelines and parameters for validation of the method used to ensure the validity results. The analytical parameters determined for method validation are linearity, working range, detection and quantification limits, precision, accuracy and uncertainty. The results, for linearity show a coefficient of correlation higher than r = 0.999 for each calibration curve, LD is equal to 0.002 ug / ml and the LC is 0.08 ug / ml. The working range comprises a concentration of 0.008 mg / ml of riboflavin as a lower limit and 1,003 ug / ml of riboflavin as an upper limit. The coefficient of variation for repeatability and reproducibility is less than 3 and 5% respectively. To determine the accuracy, a Z-score within the limits for each MRC was considered. Finally it was identified a combined and expanded uncertainty for the first three levels set of +/- 0.04 and +/- 0.08 mg vitamin B2 per 100 g of sample respectively. For the last level value it was established an uncertainty value of 0.05 +/- combined and expanded uncertainty equal to +/- 0.09 mg vitamin B2 per 100 g of sample, working at a confidence interval of 95% with a coverage factor k = 2.
Description: La validación de métodos analíticos es un proceso indispensable que los laboratorios deben implementar para garantizar que los resultados obtenidos en los análisis son fiables y reproducibles con un fundamento y análisis estadístico. De igual manera la metodología empleada para la validación muestra un gran desempeño en las condiciones de trabajo de Ecuachemlab Cía. Ltda. Para la determinación de Vitamina B2 (Riboflavina) por Cromatografía Líquida de Alta Eficacia (HPLC) se empleó la metodología descrita en el Método AOAC 970.65 modificado y la norma ISO/IEC 17025 que describe las directrices y parámetros para la validación del método asegurando la validez de los resultados. Los parámetros analíticos que se determinaron son: linealidad, rango de trabajo, límites de detección y cuantificación, precisión, exactitud e incertidumbre. Los resultados obtenidos muestran para la linealidad un coeficiente de correlación superior a r=0,999 para cada curva de calibración, el LD es igual a 0,002 µg/ml y el LC es de 0,08 µg/ml. El rango de trabajo comprende una concentración de 0,008 µg/ml de riboflavina como límite inferior y 1,003 µg/ml de riboflavina como límite superior. El coeficiente de variación por repetibilidad y reproducibilidad es menor al 3 y 5% respectivamente, para determinar la exactitud se consideró un Z-score que se encuentra dentro de los límites establecidos para cada MRC. Finalmente se determinó una Incertidumbre Combinada y Expandida para los tres primeros niveles establecidos de +/-0,04 y +/-0,08 mg de vitamina B2 por cada 100 g de muestra respectivamente. Para el último nivel se estableció un valor de Incertidumbre Combinada de +/-0,05 e Incertidumbre Expandida igual a +/-0,09 mg de vitamina B2 por cada 100 g de muestra, trabajando a un intervalo de confianza del 95% con un factor de cobertura k=2.
URI: http://repositorio.uta.edu.ec/jspui/handle/123456789/23837
Appears in Collections:Carrera Ingeniería Bioquímica

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